Gen OLIG dirigido a células madre pluripotentes humanas para la diferenciación de neuronas motoras y oligodendrocitos.
Año de publicación:
2011
Identificación de PubMed:
21527921
Subvenciones de financiación:
Resumen público:
Las células madre pluripotentes pueden marcarse genéticamente para facilitar los estudios de diferenciación. En este artículo, describimos un protocolo de orientación genética para introducir un casete de GFP en loci genéticos clave en células madre pluripotentes humanas (hPSC) y luego utilizar las hPSC genéticamente marcadas para guiar la diferenciación in vitro, los perfiles inmunocitoquímicos y electrofisiológicos e in vivo. Caracterización tras el trasplante de células. Los factores de transcripción Olig tienen funciones clave en las vías reguladoras de la transcripción para la génesis de neuronas motoras (MN) y oligodendrocitos (OL). Hemos generado líneas informadoras de hPSC OLIG2-GFP que marcan de manera confiable MN y OL para monitorear su diferenciación secuencial de hPSC. La expresión del reportero GFP recapitula la expresión endógena de los genes OLIG. La caracterización in vitro de células purificadas por clasificación de células activadas por fluorescencia es consistente con células de los linajes MN u OL, dependiendo de las etapas en las que se recolectan. Este protocolo es eficiente y confiable y generalmente demora entre 5 y 7 meses en completarse. La metodología de diferenciación y etiquetado genético utilizada en este documento proporciona un marco general para trabajos similares para la diferenciación de hPSC en otros linajes.
Resumen científico:
Las células madre pluripotentes pueden marcarse genéticamente para facilitar los estudios de diferenciación. En este artículo, describimos un protocolo de orientación genética para introducir un casete de GFP en loci genéticos clave en células madre pluripotentes humanas (hPSC) y luego utilizar las hPSC genéticamente marcadas para guiar la diferenciación in vitro, los perfiles inmunocitoquímicos y electrofisiológicos e in vivo. Caracterización tras el trasplante de células. Los factores de transcripción Olig tienen funciones clave en las vías reguladoras de la transcripción para la génesis de neuronas motoras (MN) y oligodendrocitos (OL). Hemos generado líneas informadoras de hPSC OLIG2-GFP que marcan de manera confiable MN y OL para monitorear su diferenciación secuencial de hPSC. La expresión del reportero GFP recapitula la expresión endógena de los genes OLIG. La caracterización in vitro de células purificadas por clasificación de células activadas por fluorescencia es consistente con células de los linajes MN u OL, dependiendo de las etapas en las que se recolectan. Este protocolo es eficiente y confiable y generalmente demora entre 5 y 7 meses en completarse. La metodología de diferenciación y etiquetado genético utilizada en este documento proporciona un marco general para trabajos similares para la diferenciación de hPSC en otros linajes.