T-Pure: herramienta de procesamiento de sangre periférica para la fabricación de CAR-T en el punto de atención

El objetivo de este estudio fue establecer una plataforma robusta, reproducible y regulatoria para la fabricación de células CAR-T de sangre periférica que elimina la dependencia de la aféresis, garantizando al mismo tiempo la calidad del producto y la seguridad del paciente. Demostramos que el flujo de trabajo T-Rapid Select, gracias al novedoso reactivo T-Pure, puede enriquecer consistentemente las células T sanas y funcionales, eliminar los tipos celulares no deseados y facilitar la modificación genética posterior y la expansión a dosis clínicamente relevantes.

Para corroborarlo, se llevaron a cabo pruebas exhaustivas durante el proceso y del producto final en cinco muestras de donantes representativas, incluidos un voluntario sano, dos pacientes con linfoma y dos pacientes con mieloma múltiple, para evaluar el rendimiento en el mundo real en una variedad de antecedentes clínicos.

Las actividades clave incluyeron:

• Seguimiento del recuento celular y la viabilidad: el monitoreo de la producción de células viables y la viabilidad en etapas clave confirmó que el flujo de trabajo mantiene una salud celular sólida, respalda una expansión significativa de células T para la mayoría de los donantes e identifica limitaciones en casos desafiantes como el mieloma fuertemente pretratado.
• Se realizaron pruebas de número de copias del vector (VCN) y lentivirus competentes para la replicación (RCL) para verificar que la transducción lentiviral produce una transferencia genética segura y efectiva dentro del rango objetivo regulatorio de 1 a 3 copias por genoma y que no se detectó ningún virus competente para la replicación, satisfaciendo los requisitos críticos de CMC y seguridad del paciente.
• La inmunofenotipificación por citometría de flujo mediante análisis de múltiples marcadores demostró que el proceso logra una pureza de células T alta >95 % en donantes sanos y con linfoma, subconjuntos CD4/CD8 equilibrados y una eliminación efectiva de células B contaminantes (CD19+) y células mieloides (CD14+), cumpliendo con las expectativas básicas para las especificaciones clínicas de CAR-T.
• El control de calidad y la liberación de lotes se sometieron a pruebas exhaustivas de esterilidad, endotoxinas, tinción de Gram y detección de micoplasma para confirmar que todos los ensayos de ingeniería estaban libres de contaminación microbiana, lo que demuestra la preparación del sistema para una ampliación de escala y un uso clínico que cumplen con las GMP.

En conjunto, estos datos demuestran que el flujo de trabajo de fabricación de T-Rapid Select puede producir de forma reproducible productos de células CAR-T de alta calidad a partir de muestras estándar de sangre periférica, con métricas de pureza, viabilidad, modificación genética y seguridad que cumplen con las expectativas de la FDA para la presentación de solicitudes de autorización de comercialización (IND). Este trabajo valida el proceso como una base sólida para la transición a un sistema cerrado y automatizado, conforme a las BPM, lo que respalda directamente el objetivo del programa de hacer que las terapias CAR-T avanzadas sean más accesibles, asequibles e implementables en el punto de atención.