Optimización de la inducción retiniana basada en microambientes utilizando células madre pluripotentes reporteras CRISPR-CAS9 como fuente expandible de progenitores y fotorreceptores retinianos.

Un objetivo principal de este trabajo fue desarrollar la capacidad técnica para generar grandes reservas de tejidos retinianos derivados de células madre reproducibles que podrían usarse potencialmente con fines de trasplante. Históricamente, una limitación al uso de tejidos retinianos derivados de células madre ha sido las bajas tasas de conversión de células madre en tejidos retinianos y la reproducibilidad, lo que plantea dudas sobre la seguridad. Comenzamos este proyecto generando reporteros específicos del tipo de células de la retina utilizando la edición de genes CRISPR-Cas9. Las herramientas que desarrollamos nos permiten monitorear las células en su transición de una célula madre a una neurona de la retina. Utilizando estas herramientas, comenzamos una serie de experimentos para optimizar el crecimiento de las células de la retina utilizando imágenes de alto contenido de una gran cantidad de organoides derivados de células madre. A través de estos experimentos pudimos optimizar condiciones que van desde el microambiente en el que crecen las células hasta la regulación del factor de crecimiento. Logramos con éxito nuestro objetivo de producir tejidos retinianos confiables y robustos. Para verificar la autenticidad de estos tejidos utilizamos una variedad de técnicas de secuenciación de próxima generación para cuantificar la expresión genética, la expresión de microARN y el paisaje de cromatina de las células en desarrollo. Utilizando estas herramientas, hemos identificado una serie de biomarcadores que creemos ayudarán a identificar tejidos retinianos aptos para trasplantes a partir de retinas derivadas de cualquier fuente de células madre.