Mapeo de las respuestas espaciales y temporales de la microglía derivada de hESC para repetir una lesión cerebral cerrada leve para identificar objetivos y mecanismos terapéuticos
Detalles de la concesión de la subvención
Tipo de subvención:
Conceder número:
DISCO0-14447
Investigador(es):
Enfoque de la enfermedad:
Uso de células madre humanas:
Valor del premio:
$1,339,685
Estatus
Activo(s)
Detalles de la solicitud de subvención
Titulo de la aplicación:
Mapeo de las respuestas espaciales y temporales de la microglía derivada de hESC para repetir una lesión cerebral cerrada leve para identificar objetivos y mecanismos terapéuticos
Resumen público:
Objetivo de la investigación
Generaremos un mapa de activación de ARN de los estados de activación de la microglía derivados de células madre humanas después de una lesión cerebral para luego probar un nuevo mecanismo de administración de péptidos de microglía editado genéticamente.
Impacto
Cuellos de botella con las respuestas de la microglía humana dependientes del tiempo y el sexo ante una lesión cerebral cerrada leve y repetida y preguntas sobre la administración y eficacia de un factor trófico como terapéutico.
Principales actividades propuestas
Generaremos un mapa de activación de ARN de los estados de activación de la microglía derivados de células madre humanas después de una lesión cerebral para luego probar un nuevo mecanismo de administración de péptidos de microglía editado genéticamente.
Impacto
Cuellos de botella con las respuestas de la microglía humana dependientes del tiempo y el sexo ante una lesión cerebral cerrada leve y repetida y preguntas sobre la administración y eficacia de un factor trófico como terapéutico.
Principales actividades propuestas
- Genere un mapa de ARN de la respuesta microglial humana para repetir conmociones cerebrales leves en múltiples momentos posteriores a la lesión en ratones trasplantados con microglía derivada de células madre masculinas y femeninas.
- Utilice microscopía para validar histológicamente las poblaciones de microglía identificadas en la Actividad 1 expresan genes candidatos de las respuestas de lesión temprana versus tardía y/o masculina versus femenina.
- CRISPR edita líneas de células madre masculinas y femeninas para agregar la secuencia de un factor trófico secretado acoplado a un péptido informador al final de los genes de respuesta a lesiones seleccionados que se encuentran en la Actividad 1.
- Verifique que la microglía generada a partir de la edición CRISPR sea diferente a las líneas parentales diseñadas en la Actividad 3 (control de calidad).
- Estimule las líneas microgliales editadas con CRISPR en cultivo celular para confirmar que el factor trófico/péptido informador responde a la lesión y se secreta.
- Realice repetidas conmociones cerebrales leves en ratones trasplantados con líneas celulares microgliales diseñadas con CRISPR y verifique que el factor trófico/péptido informador insertado se entregue al sitio de la lesión.
Declaración de beneficio para California:
Esta investigación podría beneficiar a California al descubrir genes que están específicamente regulados positivamente en la microglía en respuesta a una lesión cerebral. Editar un gen para administrar un factor trófico a la lesión podría ser una vía para tratar conmociones cerebrales/lesiones craneales cerradas o incluso lesiones cerebrales traumáticas más graves (que afectan a más de 230,000 9.6 californianos al año y cuestan a CA aproximadamente XNUMX XNUMX millones cada año). Este cuello de botella también podría abrir la puerta a tratamientos basados en células madre para una variedad de afecciones neurológicas.