Receptor de antígeno quimérico dirigido a la glicoproteína espiga del SARS-cov2

Hemos generado con éxito plásmidos de transferencia de lentivirus del receptor de antígeno quimérico de segunda y próxima generación dirigidos a la glicoproteína de pico del nuevo coronavirus (SARS-CoV2) utilizando diferentes estructuras, vectores y promotores. Expresamos los plásmidos de transferencia de lentivirus CAR en células de mamíferos para generar partículas de lentivirus que se usaron para infectar una línea de células madre inducidas (iPSC). Seleccionamos una población estable de la línea de células madre que expresa las diferentes construcciones CAR y confirmamos la expresión del CAR en ellas. Posteriormente diferenciamos la línea de células madre que expresan CAR y pudimos generar con éxito células progenitoras sanguíneas a partir de ellas. Luego los diferenciamos en el linaje de células NK. En nuestro intento inicial pudimos generar células NK pero el rendimiento fue pobre. Por lo tanto, probamos varios enfoques para mejorar la diferenciación y la generación de células NK que expresan CAR, incluido el uso de diferentes promotores y una nueva plataforma CAR de próxima generación. Generamos con éxito células madre que expresan estas construcciones CAR y volvimos a intentar su diferenciación en células NK. Pudimos generar células que expresaban el CAR que expresaba CD2, una proteína clave expresada en las células NK. Sin embargo, las células NK desarrolladas por nuestro protocolo difieren en la falta de expresión de otra proteína expresada en células NK derivadas de sangre periférica normal. Estamos planeando modificar nuestro protocolo de diferenciación y utilizar una línea de células madre diferente para optimizar la generación de células NK que expresan CAR.