El uso de una tecnología de plataforma genética molecular para producir proteínas wnt humanas revela distintas capacidades de señalización local y distal.
Año de publicación:
2013
Identificación de PubMed:
23516471
Subvenciones de financiación:
Resumen público:
Este manuscrito describe un nuevo sistema de cultivo celular para producir proteínas biológicamente activas, como las WNT, que tienen potentes actividades de células madre. El sistema permite altos niveles de producción de estas proteínas y las hará más fácilmente disponibles para la comunidad científica. Los artículos también aclaran diferencias importantes en las actividades entre las diversas proteínas WNT, algunas actuando a largas distancias y otras a cortas distancias. Las líneas celulares transgénicas harán que el uso y la aplicación de proteínas WNT sean más comunes y asequibles.
Resumen científico:
Los estudios funcionales y mecanicistas de la señalización Wnt se han visto gravemente obstaculizados por la inaccesibilidad de las proteínas bioactivas. Para superar esta barrera de larga data, diseñamos y caracterizamos un panel de líneas celulares de ovario de hámster chino (CHO) con transgenes inducibles que codifican WNT1, WNT3A, WNT5A, WNT7A, WNT11, WNT16 humanos marcados y no etiquetados o el antagonista soluble de Wnt Fzd8CRD. , todos integrados en un locus genómico idéntico. Utilizando un ensayo cuantitativo de bioluminiscencia en tiempo real, mostramos que las células que expresan WNT1, 3A y 7A estimulan la actividad informadora de Wnt/beta-catenina, mientras que las otras líneas celulares que expresan WNT interfieren con esta activación. Además, a diferencia de WNT3A, WNT1 solo muestra actividad cuando está asociado a células y, por lo tanto, solo envía señales a las células vecinas. El ensayo reportero también reveló una rápida disminución de la actividad Wnt a 37 grados C, lo que indica que la actividad Wnt es muy lábil. Estas líneas celulares diseñadas reducirán el costo de producir y purificar proteínas Wnt y servirán como una fuente continua, confiable y regulable de Wnts para laboratorios de investigación de todo el mundo.