Corrección somática de la epidermólisis ampollosa de la unión mediante una variante de AAV altamente recombinógena.

La corrección definitiva de enfermedades que causan mutaciones en células somáticas mediante recombinación homóloga (HR) es un enfoque terapéutico atractivo para el tratamiento de enfermedades genéticas. Sin embargo, la terapia génica somática basada en HR está limitada por la baja eficiencia de la selección de genes en células de mamíferos y la senescencia replicativa de las células primarias ex vivo, lo que obliga a los investigadores a explorar estrategias alternativas como la transferencia de genes retro y lentivirales, o la edición del genoma en pacientes pluripotentes inducidos. Células madre. Aquí, informamos la corrección de mutaciones en el locus LAMA3 en queratinocitos primarios derivados de un paciente afectado por el trastorno de epidermólisis ampollosa de la unión de Herlitz (H-JEB) hereditario recesivo utilizando HR mediada por virus adenoasociado recombinante (rAAV). Identificamos un serotipo de AAV altamente recombinógeno, AAV-DJ, que media la focalización genética eficiente en los queratinocitos en frecuencias clínicamente relevantes con una baja tasa de integración aleatoria. Se seleccionaron células de pacientes H-JEB específicas en función de la restauración del fenotipo de adhesión, lo que eliminó la necesidad de secuencias extrañas en las células reparadas, mejorando el uso clínico y el perfil de seguridad de nuestro enfoque. Los grupos corregidos de células primarias ensamblaron el heterotrímero de laminina-332 funcional y revirtieron completamente el fenotipo de ampollas tanto in vitro como en injertos de piel. La focalización eficiente del locus LAMA3 por parte de AAV-DJ mediante selección fenotípica, junto con la baja frecuencia observada de eventos fuera del objetivo, hace que la focalización de células somáticas basada en AAV-DJ sea una estrategia prometedora para la terapia ex vivo para este trastorno epitelial grave y a menudo letal. .