Citometría de masa unicelular adaptada a las mediciones del ciclo celular.
Año de publicación:
2012
Identificación de PubMed:
22693166
Subvenciones de financiación:
Resumen público:
La citometría de masas es una nueva tecnología que puede realizar análisis simultáneos de 40 o más parámetros en células individuales mediante espectrometría de masas y anticuerpos conjugados con metales pesados. Se ha utilizado con éxito para el análisis simultáneo de tipos celulares complejos y vías de señalización intracelular. Sin embargo, no se disponía de reactivos de citometría de masas para analizar la proliferación y el ciclo celular, que son fundamentales para el estudio de la biología celular, en particular el cáncer y la tumorigénesis. Para abordar esto, Behbehani y sus compañeros de trabajo han desarrollado una nueva metodología de citometría de masas para medir todas las fases del ciclo celular simultáneamente dentro de muestras complejas, mientras miden simultáneamente hasta 30 parámetros adicionales. La adición del análisis del ciclo celular aumenta en gran medida la utilidad de la citometría de masas para todos los campos y sólo aumentará la tasa de adopción de esta nueva e interesante tecnología.
Resumen científico:
La citometría de masas es una tecnología introducida recientemente que utiliza anticuerpos etiquetados con isótopos de elementos de transición para la detección de proteínas en una sola célula. Al sortear las limitaciones de la superposición espectral de emisión asociada con los fluorocromos utilizados en la citometría de flujo tradicional, la citometría de masas actualmente permite medir hasta 40 parámetros por célula. Recientemente, se describió un análisis integral de citometría de masas para el programa de diferenciación hematopoyética en médula ósea humana de un donante sano. El estudio actual describe enfoques para delinear las etapas del ciclo celular utilizando 5-yodo-2-desoxiuridina (IdU) para marcar las células en la fase S, simultáneamente con anticuerpos contra la ciclina B1, la ciclina A y la histona fosforilada H3 (S28) que caracterizan a la otra célula. fases del ciclo. Se desarrollaron protocolos en los que se utilizó un anticuerpo contra la proteína fosforilada del retinoblastoma (Rb) en las serinas 807 y 811 para separar células en las fases G0 y G1 del ciclo celular. Este método de citometría de masas produjo distribuciones del ciclo celular de poblaciones de células normales y cancerosas que eran equivalentes a las obtenidas mediante técnicas tradicionales de citometría de fluorescencia. Aplicamos esto para mapear las fases del ciclo celular de las células que abarcan la jerarquía hematopoyética en la médula ósea humana sana como preludio de estudios posteriores con cánceres y otros trastornos de este linaje. (c) 2012 Sociedad Internacional para el Avance de la Citometría.