Cuantificación de la distribución subcelular de proteínas de fusión fluorescentes en células que migran dentro de los tejidos.
Año de publicación:
2010
Identificación de PubMed:
20956985
Subvenciones de financiación:
Resumen público:
El movimiento de proteínas dentro de las células puede proporcionar indicaciones dinámicas de la señalización celular y la polaridad celular, pero se necesitan métodos para rastrear y cuantificar el movimiento de proteínas subcelulares dentro de los entornos tisulares. Aquí presentamos un enfoque semiautomatizado para cuantificar la ubicación de proteínas subcelulares para cientos de células migratorias dentro de tejido vivo intacto utilizando proteínas fluorescentes modificadas genéticamente y microscopía de dos fotones en lapso de tiempo de lóbulos del timo intactos. Hemos validado el método utilizando un marcador de polaridad celular y un marcador de señalización del receptor de células T, y hemos relacionado la distribución asimétrica de estas proteínas con la dirección y velocidad de la migración celular. Estos enfoques podrían adaptarse fácilmente a otras proteínas de fusión fluorescentes, tejidos y cuestiones biológicas.
Resumen científico:
El movimiento de proteínas dentro de las células puede proporcionar indicaciones dinámicas de la señalización celular y la polaridad celular, pero se necesitan métodos para rastrear y cuantificar el movimiento de proteínas subcelulares dentro de los entornos tisulares. Aquí presentamos un enfoque semiautomatizado para cuantificar la ubicación de proteínas subcelulares para cientos de células migratorias dentro de tejido vivo intacto utilizando proteínas de fusión fluorescentes expresadas retroviralmente y microscopía de dos fotones en lapso de tiempo de lóbulos tímicos intactos. Hemos validado el método utilizando GFP-PKCzeta, un marcador de polaridad celular, y LAT-GFP, un marcador de señalización del receptor de células T, y hemos relacionado la distribución asimétrica de estas proteínas con la dirección y velocidad de la migración celular. Estos enfoques podrían adaptarse fácilmente a otras proteínas de fusión fluorescentes, tejidos y cuestiones biológicas. Publicación en línea anticipada de Immunology and Cell Biology, 19 de octubre de 2010; doi:10.1038/icb.2010.122.