Una plataforma para la generación rápida de reporteros únicos y multiplexados en líneas iPSC humanas.

Las células madre pluripotentes inducidas (iPSC) son herramientas importantes para ensayos de descubrimiento de fármacos y exámenes toxicológicos. En este manuscrito, diseñamos TALEN y ZFN de alta eficiencia para apuntar a dos sitios de puerto seguro en los cromosomas 13 y 19 en una línea iPSC libre de integración ampliamente disponible y bien caracterizada. Mostramos que estos sitios pueden apuntarse en múltiples líneas iPSC para generar sistemas informadores conservando características pluripotentes. Ampliamos este concepto para crear reporteros de linaje utilizando una estrategia de orientación C-terminal a genes endógenos que se expresan de una manera específica de linaje. Además, demostramos que podemos desarrollar una estrategia de línea celular maestra y luego utilizar una estrategia de intercambio de casetes inducida por Cre-recombinasa para intercambiar rápidamente casetes indicadores para desarrollar nuevas líneas indicadoras en el mismo fondo isogénico con alta eficiencia. Igualmente importante es que mostramos que esta estrategia de recombinación permite apuntar a etapas de células progenitoras, aumentando aún más la utilidad del sistema de plataforma. Los resultados en conjunto proporcionan una plataforma novedosa para desarrollar rápidamente sistemas personalizados de reportero único o dual para ensayos de detección.