Medición del metabolismo energético en células cultivadas, incluidas células madre pluripotentes humanas y células diferenciadas.
Año de publicación:
2012
Identificación de PubMed:
22576106
Subvenciones de financiación:
Resumen público:
Se requieren mediciones de la glucólisis y la función mitocondrial para cuantificar el metabolismo energético en una amplia variedad de contextos celulares. En las células madre pluripotentes humanas (hPSC) y su progenie diferenciada, este análisis puede ser un desafío debido a las propiedades celulares únicas, las condiciones de crecimiento y los gastos necesarios para mantener estos tipos de células. Aquí proporcionamos protocolos para analizar el metabolismo energético en hPSC y sus progenies diferenciadas tempranas que generalmente también son aplicables a tipos de células maduras. Nuestro enfoque ha revelado distintos perfiles de metabolismo energético utilizados por hPSC, células diferenciadas, una variedad de células cancerosas y células Rho-nulas. Los protocolos miden o estiman la glucólisis en función de la tasa de acidificación extracelular y miden o estiman la fosforilación oxidativa en función de la tasa de consumo de oxígeno. Los ensayos normalmente requieren 3 h después de la preparación de la muestra durante la noche. También se analizan y proporcionan métodos complementarios para ayudar a los investigadores a desarrollar regímenes experimentales más sofisticados para análisis ampliados de bioenergética celular.
Resumen científico:
Se requieren mediciones de la glucólisis y la función mitocondrial para cuantificar el metabolismo energético en una amplia variedad de contextos celulares. En las células madre pluripotentes humanas (hPSC) y su progenie diferenciada, este análisis puede ser un desafío debido a las propiedades celulares únicas, las condiciones de crecimiento y los gastos necesarios para mantener estos tipos de células. Aquí proporcionamos protocolos para analizar el metabolismo energético en hPSC y sus progenies diferenciadas tempranas que generalmente también son aplicables a tipos de células maduras. Nuestro enfoque ha revelado distintos perfiles de metabolismo energético utilizados por hPSC, células diferenciadas, una variedad de células cancerosas y células Rho-nulas. Los protocolos miden o estiman la glucólisis en función de la tasa de acidificación extracelular y miden o estiman la fosforilación oxidativa en función de la tasa de consumo de oxígeno. Los ensayos normalmente requieren 3 h después de la preparación de la muestra durante la noche. También se analizan y proporcionan métodos complementarios para ayudar a los investigadores a desarrollar regímenes experimentales más sofisticados para análisis ampliados de bioenergética celular.