Aislamiento de células madre del músculo esquelético mediante clasificación de células activada por fluorescencia.
Año de publicación:
2015
Identificación de PubMed:
26401916
Subvenciones de financiación:
Resumen público:
El aislamiento prospectivo de poblaciones de células madre purificadas ha alterado drásticamente el campo de la biología de las células madre y ha sido un foco importante de investigación en tejidos de diferentes organismos. Las células madre musculares se encuentran ahora entre las poblaciones de células madre más estudiadas en sistemas de mamíferos y el aislamiento prospectivo de estas células ha permitido caracterizaciones celulares y moleculares que no se habían soñado hace una década. En este protocolo, describimos un método para aislar células madre musculares de los músculos de las extremidades de ratones adultos en función de los marcadores específicos y únicos que estas células poseen en su superficie. Proporcionamos una descripción detallada de la disociación física y enzimática para liberar todas las células del músculo, un procedimiento esencial para maximizar la producción celular. También describimos un método que se utiliza posteriormente para separar las células madre musculares de otros tipos de células utilizando marcadores específicos. Se ha demostrado que el protocolo es eficiente y confiable y se utiliza ampliamente en laboratorios de todo el mundo.
Resumen científico:
El aislamiento prospectivo de poblaciones de células madre purificadas ha alterado drásticamente el campo de la biología de las células madre y ha sido un foco importante de investigación en tejidos de diferentes organismos. Las células madre musculares (MuSC) se encuentran ahora entre las poblaciones de células madre más intensamente estudiadas en sistemas de mamíferos, y el aislamiento prospectivo de estas células ha permitido caracterizaciones celulares y moleculares que ni siquiera se soñaban hace una década. En este protocolo, describimos cómo aislar MuSC de los músculos de las extremidades de ratones adultos mediante clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS). Proporcionamos una descripción detallada de la disociación física y enzimática de las células mononucleadas de los músculos de las extremidades, un procedimiento esencial para maximizar el rendimiento celular. También describimos un método basado en FACS que se utiliza posteriormente para obtener poblaciones altamente puras de MuSC activadas o inactivas (VCAM(+)CD31(-)CD45(-)Sca1(-)). El proceso de aislamiento tarda aproximadamente entre 5 y 6 h en completarse. El protocolo también permite el aislamiento de células endoteliales, células hematopoyéticas y células madre mesenquimales del tejido muscular.