Knockin del casete genético intraembrionario mediante edición del genoma mediada por CRISPR/Cas9 con un vector viral asociado a adenosina.
Año de publicación:
2018
Identificación de PubMed:
30447647
Subvenciones de financiación:
Resumen público:
La edición genética eficiente de embriones animales para investigación tiene el potencial de acelerar los descubrimientos científicos y desarrollar nuevos modelos para estudiar enfermedades. Aquí, desarrollamos un método fácil y eficiente para insertar secuencias de ADN en el genoma de embriones animales combinando enfoques de edición de genes CRISPR/Cas9 con transducción de virus adenoasociados recombinantes.
Resumen científico:
La edición del genoma intraembrionario mediante CRISPR/Cas9 permite la generación sencilla de animales modificados genéticamente mediante mutaciones de cambio de marco mediadas por unión de extremos no homólogos (NHEJ) o mutaciones puntuales mediadas por reparación dirigida por homología (HDR). Sin embargo, todavía es difícil introducir grandes modificaciones, como el reemplazo de genes o las fusiones de genes, en embriones sin costosos micromanipuladores. Además, las técnicas de micromanipulación para la edición del genoma intraembrionario se han establecido sólo en un pequeño grupo de animales. Para superar estos problemas, desarrollamos un método de activación de fragmentos grandes de ADN sin micromanipulación. En este estudio, entregamos con éxito el ADN del donante knockin en cigotos mediante virus adenoasociado (AAV) sin eliminar la zona pelúcida, y logramos tanto el knockin de fragmentos grandes de ADN como el intercambio de exones completos con electroporación de ribonucleoproteína CRISPR/Cas9. Mediante este método, podemos intercambiar grandes fragmentos de ADN cómodamente en varias especies animales sin micromanipulación.