La microinyección CRISPR/Cas9 en ovocitos inhibe el desarrollo del páncreas en ovejas.
Año de publicación:
2017
Identificación de PubMed:
29234093
Subvenciones de financiación:
Resumen público:
La lista de espera para trasplantes de órganos humanos es larga. Un objetivo importante de la medicina regenerativa es generar un suministro estable de órganos para trasplantes que no dependa de la donación de órganos humanos. Por ejemplo, un trasplante de páncreas puede curar a pacientes con diabetes tipo 1. Anteriormente hemos demostrado que se pueden generar de manera eficiente órganos sólidos complejos a partir de iPSC mediante un proceso llamado organogénesis entre especies. En última instancia, queremos generar órganos humanos en animales grandes como las ovejas. Sin embargo, para una formación eficaz de órganos humanos, debemos impedir que se forme el órgano de oveja. Este trabajo representa un paso importante hacia este objetivo al bloquear genéticamente el desarrollo del páncreas en ovejas.
Resumen científico:
Uno de los objetivos finales de la medicina regenerativa es la generación de órganos específicos para cada paciente a partir de células madre pluripotentes (PSC). Las ovejas son huéspedes potenciales para el crecimiento de órganos humanos mediante la técnica de complementación de blastocistos. Aquí informamos la creación de ovejas con discapacidad de pancreatogénesis mediante microinyección de ovocitos de CRISPR/Cas9 dirigida a PDX1, un gen crítico para el desarrollo del páncreas. Comparamos la eficiencia de las mutaciones diana después de microinyectar el sistema CRISPR/Cas9 en ovocitos en metafase II (MII) y embriones en estadio cigoto. La microinyección de ovocitos MII redujo la lisis, mejoró la tasa de blastocistos, aumentó el número de mutaciones bialélicas dirigidas y dio como resultado un grado similar de mosaicismo en comparación con la microinyección de cigotos. Si bien el uso de un solo sgRNA fue eficaz para inducir fetos mutados, la falta de inactivación completa del gen dio como resultado animales con un páncreas intacto. Cuando utilizamos un sistema dual de sgRNA, logramos una interrupción completa de PDX1. Este feto PDX1(-/-) carecía de páncreas y proporciona la base para la producción de ovejas editadas genéticamente como huésped para la generación de órganos entre especies. En el futuro, combinar la edición de genes con CRISPR/Cas9 y la complementación de PSC podría dar como resultado un enfoque poderoso para la generación de órganos humanos.