Una hoja de ruta molecular continua para la reprogramación de iPSC mediante análisis de progresión de citometría de masa unicelular.
Año de publicación:
2015
Identificación de PubMed:
25748935
Subvenciones de financiación:
Resumen público:
Zunder et al. analizaron tres sistemas de reprogramación de fibroblastos mediante citometría de masas, midiendo la expresión de proteínas, el estado del ciclo celular y la señalización celular a nivel unicelular. Utilizando análisis de progresión resueltos en el tiempo, identifican puntos de referencia de reprogramación compartidos entre sistemas y proporcionan una referencia integral para los cambios dinámicos que ocurren durante la reprogramación celular.
Resumen científico:
Para analizar la reprogramación celular a nivel unicelular, se utilizó citometría masiva para medir simultáneamente marcadores de pluripotencia, diferenciación, estado del ciclo celular y señalización celular durante todo el proceso de reprogramación. Se utilizó un análisis de progresión resuelto en el tiempo de los conjuntos de datos resultantes para construir una hoja de ruta molecular continua para tres sistemas de reprogramación independientes. Aunque estos sistemas variaron sustancialmente en la estequiometría Oct4, Sox2, Klf4 y c-Myc, presentaron un conjunto común de puntos de referencia de reprogramación. Al principio del proceso de reprogramación, las células Oct4(alta)Klf4(alta) pasaron a un estado parcialmente reprogramado CD73(alto)CD104(alto)CD54(bajo). Las células Ki67 (baja) de esta población intermedia volvieron a un fenotipo similar a MEF, pero las células Ki67 (alta) avanzaron a través del MET y luego se bifurcaron en dos poblaciones distintas: una Nanog (alta) Sox2 (alta) CD54 (alta) similar a ESC ) y una población Nanog(baja)Sox2(baja)Lin28(alta)CD24(alta)PDGFR-alfa(alta) similar al mesendodermo. Los métodos desarrollados aquí para el análisis de progresión unicelular resuelto en el tiempo se pueden utilizar para el estudio de sistemas dinámicos y complejos adicionales, como la progresión del cáncer y el desarrollo embrionario.