Comparación de sistemas de cultivo definidos para la propagación libre de células alimentadoras de células madre embrionarias humanas.
Año de publicación:
2010
Identificación de PubMed:
20186512
Subvenciones de financiación:
Resumen público:
Un objetivo importante de la investigación con células madre humanas ha sido el desarrollo de medios definidos libres de productos animales para su uso en investigaciones y futuras aplicaciones terapéuticas. Un consorcio internacional de laboratorios estudió un medio de cultivo completamente definido para determinar su capacidad de favorecer el crecimiento de células madre pluripotentes humanas. Muchas formulaciones de medios publicadas no eran lo suficientemente sólidas como para respaldar el crecimiento de un panel de líneas celulares stme. Dos medios disponibles comercialmente funcionaron bien en la mayoría de los ensayos realizados en la mayoría de los laboratorios.
Resumen científico:
Hay muchos informes sobre sistemas de cultivo definidos para la propagación de células madre embrionarias humanas en ausencia de soporte de células alimentadoras, pero ningún estudio previo ha realizado una comparación en varios laboratorios de estas diversas metodologías. En este estudio, cinco laboratorios separados, cada uno con experiencia en cultivo de células madre embrionarias humanas, utilizaron un panel de diez líneas de células madre embrionarias (incluida WA09 como línea celular índice común a todos los laboratorios) para evaluar ocho métodos de cultivo celular, con propagación en la presencia de Knockout Serum Reemplazor, FGF-2 y capas de células alimentadoras de fibroblastos embrionarios de ratón sirven como control positivo. Los cultivos se evaluaron durante hasta diez pases para determinar la unión, la muerte y la morfología diferenciada mediante microscopía de contraste de fases, el crecimiento mediante recuentos celulares en serie y el mantenimiento de la expresión del marcador de superficie de las células madre mediante citometría de flujo. De los ocho sistemas de cultivo, solo el control y los basados en dos medios comerciales, mTeSR1 y STEMPRO, respaldaron el mantenimiento de la mayoría de las líneas celulares durante diez pases. Los cultivos cultivados en los medios restantes fracasaron antes de este punto debido a la falta de unión, muerte celular o diferenciación celular manifiesta. Las posibles explicaciones del éxito relativo de las formulaciones comerciales en este estudio y la falta de éxito con otras formulaciones de grupos académicos en comparación con los resultados publicados anteriormente incluyen: la compleja combinación de factores de crecimiento presentes en las preparaciones comerciales; mejor desarrollo, fabricación y control de calidad de los productos comerciales; diferencias en la adaptación epigenética al cultivo in vitro entre diferentes líneas de células ES cultivadas en diferentes laboratorios.