Aislamiento clonal de células formadoras de colonias endoteliales de vellosidades coriónicas de gestación temprana de placenta humana para la regeneración de tejido fetal.

ANTECEDENTES: Las células formadoras de colonias endoteliales (ECFC) se han implicado en el proceso de vascularización, que incluye vasculogénesis y angiogénesis. La vasculogénesis es una formación de novo de vasos sanguíneos y es un proceso fisiológico esencial que ocurre durante el desarrollo embrionario y la regeneración de tejidos. La angiogénesis es el crecimiento de nuevos capilares a partir de vasos sanguíneos preexistentes, que se observa tanto prenatalmente como posnatalmente. La placenta es un órgano compuesto por una variedad de células de origen fetal, incluidas las ECFC, y por lo tanto tiene un potencial significativo como fuente de ECFC fetales para la ingeniería de tejidos. OBJETIVO: Investigar la posibilidad de aislar ECFC clonales de vellosidades coriónicas de la gestación temprana humana (CV-ECFC) de la placenta y evaluar su potencial para la ingeniería de tejidos. MÉTODOS: El tejido de las vellosidades coriónicas de la gestación temprana se disoció mediante digestión enzimática. Las células que expresan CD31 se seleccionaron mediante clasificación celular activada magnéticamente y se sembraron en medio de crecimiento endotelial específico. Después de 2-3 semanas en cultivo, las colonias que presentaban una morfología similar a un adoquín se recogieron manualmente utilizando cilindros de clonación. Caracterizamos los CV-ECFC mediante citometría de flujo, inmunofenotipado, ensayo de formación de tubos y ensayo de captación de Dil-Ac-LDL. La transducción viral de CV-ECFC se realizó utilizando un vector lentiviral que contiene luciferasa/tdTomato, y la eficiencia de la transducción se probó mediante microscopía fluorescente y citometría de flujo. La compatibilidad de los CV-ECFC con un vehículo de administración se determinó utilizando un andamio de matriz extracelular de la submucosa del intestino delgado aprobado por la FDA. RESULTADOS: Después de cuatro pases en 6-8 semanas de cultivo, obtuvimos un número total de 1.8 x 10(7) CV-ECFC utilizando 100 mg de tejido de vellosidades coriónicas de gestación temprana. Los análisis inmunofenotípicos mediante citometría de flujo demostraron que los CV-ECFC expresaban en gran medida los marcadores endoteliales CD31, CD144, CD146, CD105, CD309, sólo expresaban parcialmente CD34 y no expresaban CD45 ni CD90. Los CV-ECFC eran capaces de captar lipoproteínas acetiladas de baja densidad y formar tubos, de manera similar a los ECFC derivados de la sangre del cordón umbilical (CB-ECFC). Los CV-ECFC se pueden transducir con un vector lentiviral que contiene luciferasa/tdTomato con una eficiencia de transducción del 85.1%. La siembra de CV-ECFC en un andamio de matriz extracelular de la submucosa del intestino delgado confirmó que los CV-ECFC eran compatibles con el andamio de biomaterial. CONCLUSIÓN: En resumen, establecimos un enfoque de aislamiento clonal asistido por clasificación magnética para derivar CV-ECFC. Se puede obtener una cantidad sustancial de CV-ECFC en un corto período de tiempo, lo que representa una fuente novedosa y prometedora de ECFC para tratamientos fetales.