Ensayos de inmunoprecipitación de cromatina para Myc y N-Myc.
Año de publicación:
2013
Identificación de PubMed:
24006062
Subvenciones de financiación:
Resumen público:
Myc y N-Myc tienen impactos generalizados en el estado de la cromatina dentro de las células, tanto de manera específica de un gen como de todo el genoma. Nuestro laboratorio utiliza métodos genómicos funcionales que incluyen inmunoprecipitación de cromatina (ChIP), ChIP-chip y, más recientemente, ChIP-seq para analizar la unión y la ubicación genómica de Myc. En este capítulo, describimos un protocolo ChIP eficaz que utiliza anticuerpos validados específicos para Myc y N-Myc. Discutimos la aplicación de este protocolo a varios tipos de células madre y cancerosas, centrándonos en aspectos de la preparación de muestras antes de la preparación de la biblioteca que son fundamentales para los ensayos exitosos de Myc ChIP. Se analizan las variables clave e incluyen la cantidad inicial de células o tejido, las condiciones de lisis y sonicación, la cantidad y calidad del anticuerpo utilizado y la identificación de genes objetivo confiables para la validación de ChIP.
Resumen científico:
Myc y N-Myc tienen impactos generalizados en el estado de la cromatina dentro de las células, tanto de manera específica de un gen como de todo el genoma. Nuestro laboratorio utiliza métodos genómicos funcionales que incluyen inmunoprecipitación de cromatina (ChIP), ChIP-chip y, más recientemente, ChIP-seq para analizar la unión y la ubicación genómica de Myc. En este capítulo, describimos un protocolo ChIP eficaz que utiliza anticuerpos validados específicos para Myc y N-Myc. Discutimos la aplicación de este protocolo a varios tipos de células madre y cancerosas, centrándonos en aspectos de la preparación de muestras antes de la preparación de la biblioteca que son fundamentales para los ensayos exitosos de Myc ChIP. Se analizan las variables clave e incluyen la cantidad inicial de células o tejido, las condiciones de lisis y sonicación, la cantidad y calidad del anticuerpo utilizado y la identificación de genes objetivo confiables para la validación de ChIP.